■ 基本信息
別名: | pColdSUMO |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 4740bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-His, N-SUMO |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃ |
表達(dá)宿主: | BL21等大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG） |
3'測(cè)序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
備注: | 冷休克表達(dá)載體 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | 基因CDS
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
原核表達(dá)載體(pCold-SUMO)是在 pCold 載體基礎(chǔ)上改造而成，該載體啟動(dòng)子(CS Promoter)來(lái)源于南極嗜冷細(xì)菌，在低溫下(15 度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率，提高了蛋白可溶性表達(dá)，增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量，而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。TEE信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。
pCold-SUMO質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在E.COLI啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE）,His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長(zhǎng)，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1593 pCold-SUMO大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
