■ 基本信息
別名: | pColdI |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 4407bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-His, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度，37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | BL21等大腸桿菌 |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG） |
3'測(cè)序引物: | pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
功能簡(jiǎn)介:
| 大腸桿菌表達(dá)空載體 |
備注: | 冷啟動(dòng)表達(dá)質(zhì)粒 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
當(dāng)培養(yǎng)的大腸桿菌的溫度充分降低，幾乎暫時(shí)停止生長(zhǎng)大部分的蛋白表達(dá)減少，而此時(shí)一組蛋白質(zhì)稱為“冷休克蛋白”被專門誘導(dǎo)表達(dá)。冷休克表達(dá)載體，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。 CSPA的啟動(dòng)子的下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5'非翻譯區(qū)（5'UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE），His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于在CSPA啟動(dòng)子的下游的。由于該產(chǎn)品采用了大腸桿菌的啟動(dòng)子，大多數(shù)大腸桿菌菌株可被用作表達(dá)宿主。有四種類型的pCold載體，他們的下列原件的位置稍有不同，TEE，His標(biāo)簽序列和Factor XA酶切位點(diǎn)。
pColdI質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE）,His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長(zhǎng)，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1588 pCold I大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
