■ 基本信息
啟動子: | AOX1 |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 酵母系列，畢赤酵母表達(dá)載體 |
質(zhì)粒大小: | 9276bp |
原核抗性: | Amp,Kan |
真核抗性: | HIS4,G418 |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達(dá)宿主: | 酵母細(xì)胞 |
5'測序引物: | 5′AOX:GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
3'測序引物: | 3′AOX:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
備注: | 利用alpha分泌因子，分泌表達(dá)蛋白。 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 酵母菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: |
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片段物種: |
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原核抗性: | Amp,Kan |
真核抗性: | G418
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡介
pPIC9K載體中存在卡那抗性基因，允許利用卡那抗性在酵母體內(nèi)篩選多克隆拷貝。
1.載體大小9276 bp。
2.載體構(gòu)建過程中，可供使用的單一限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)為 SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
3.利用alpha因子分泌信號肽，分泌表達(dá)蛋白基因。
4.在載體構(gòu)建過程中，你的基因必須保證與信號肽的起始密碼子的讀碼框一致。
5.畢赤酵母中利用HIS4進(jìn)行篩選。
6.為了將基因插入GS115或KM71的AOX區(qū), 使用SacI限制性內(nèi)切酶線性化質(zhì)粒(GS115中產(chǎn)生His+Mut+基因型，KM71中產(chǎn)生His+ MutS基因型)
7.為了將基因插入GS115或KM71的His4區(qū), 使用Sal I或者Stu I限制性內(nèi)切酶線性化質(zhì)粒(GS115中產(chǎn)生His+ Mut+基因型，KM71中產(chǎn)生His+ MutS基因型)
8.將基因插入GS115的AOX1區(qū)域，需要使用Bgl II線性化質(zhì)粒 (產(chǎn)生His+MutS基因型)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK922pPIC9k畢赤酵母表達(dá)質(zhì)粒.txt
