■ 基本信息
啟動(dòng)子: | AOX1 |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 酵母系列，畢赤酵母表達(dá)載體 |
質(zhì)粒大小: | 9004bp |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | HIS4 |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達(dá)宿主: | 酵母細(xì)胞 |
5'測(cè)序引物: | AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
3'測(cè)序引物: | AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 酵母菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: |
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片段物種: |
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
PIC3.5K是一個(gè)鑒定多拷貝基因插入到畢赤酵母基因組中的載體。
1.pPIC3.5K載體大小為9004 bp。
2.在多克隆位點(diǎn)區(qū)域，擁有5個(gè)單一的限制性酶切位點(diǎn)：BamH I，Snab I，EcoR I，Avr II和Not I。
3.胞內(nèi)表達(dá)。
4.載體構(gòu)建時(shí)，需要包含一個(gè)ATG啟動(dòng)子，同時(shí)需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)
5.畢赤酵母中使用HIS4基因篩選。
6.將基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I線性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。
7.將基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I線性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。
8.將基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II限制酶線性化質(zhì)粒，產(chǎn)生的酵母基因型為His+ MutS。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK920pPIC3.5K畢赤酵母質(zhì)粒.txt
