RNApure Reagent試劑是直接從來源于人，動(dòng)植物，酵母，細(xì)菌和病毒的液體樣品中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀來還原。在除去水樣層后，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。共純化DNA對(duì)于樣品間標(biāo)準(zhǔn)化RNA的產(chǎn)量十分有用。
無論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。RNApure Reagent試劑操作上的簡單性允許同時(shí)處理多個(gè)的樣品。所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。RNApure Reagent抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆。如果是用于PCR，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí)，建議用擴(kuò)增級(jí)的DNase I來處理抽提的總RNA。
RNApure Reagent試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7 kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。
■ 儲(chǔ)存條件
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
2.不合適的儲(chǔ)存于低溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因此儲(chǔ)存在室溫下（15℃－25℃）。RNApure可以常溫運(yùn)輸，收到后4℃避光保存。
3.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
